想要獲得優質細胞與有效的實驗數據?從把細胞養好開始！
發布時間：2022-08-10 瀏覽次數：2233
從基礎的細胞培養把關細胞質量
細胞培養是所有實驗的基礎，首先必須要有穩定的培養狀況，才能區別、判定差異性，也才能將測試結果實際應用到治療、制程等應用層面。一般來說，細胞培養所需的基本條件為氣體、溫度與培養基，前 2 者可由 CO?培養箱穩定運行，培養基的部分在大多時候是需要由操作者依據不同細胞株，以進行半定制化，其中主要著重于下列幾項主要成份：
1. 5-20% 血清
細胞種類多元，一般難以將每種細胞所需的營養進行 100%解析，使用動物血清進行培養，是目前供給細胞營養豐富度的重要來源。血清中提供許多必須營養素(Protein, Lipid etc.)，并且含有許多生長因子和激素(Growth factors, Hormones)，能夠幫助細胞貼附、維持培養環境的穩定(pH, Osmolality, surface tension, Viscosity)，更有助于提高生長細胞數、增加存活率、延長繼代數，以及使細胞型態與 Cell marker 表現穩定。
2. 基礎培養基
隨多年的測試與研究發展，大部分已知且可自行制造的營養物配方已經發展成商業化的基礎培養基，其中包含各種成分與比例的碳源(Glucose、Sodium Pyruvate)、胺基酸、維生素、無機鹽類。并且以不同緩沖效能的 buffer 為基底，其中添加 HEPES 與 Sodium Bicarbonate 中和CO? 溶于液體造成的酸性(低 pH 值)及緩沖 pH。
3. 抗生素
細胞由于沒有細胞壁，因此對于大部分的抗生素具有抵抗性。剛分離的細胞有潛在污染源或是怕環境、操作造成污染時，可以添加抗生素在培養基中做為預防性措施。一般針對細菌污染常用的是 penicillin/streptomycin 二合一混合液，若是對于真菌/酵母菌可以選用penicillin/streptomycin/amphotericin B 三合一混合液。
此外，細胞的最外圍僅有薄薄的細胞膜，因而是敏感且脆弱的，因此在備置細胞培養基或是會直接接觸細胞的溶液時，都會特別留意 pH 范圍應介于 7.1-7.4、滲透壓(Osmolality)介于 310-340mOsm/kg，血紅素(Hemoglobin)會造成鉀離子濃度上升，改變細胞生理活性，如細胞內外滲透壓、電解質平衡、酸鹼平衡等，所以建議控制在≦10 mg/dL。其它象是內毒素(Endotoxin)因為會對細胞造成毒性、或可能造成不必要的細胞分化，一般也建議控制在≦10 EU/ml。
凍存流程控制以延續優質細胞
細胞冷凍是細胞培養技術的關鍵步驟，選擇合適的細胞狀態、收集細胞、確認細胞質量、到凍存液的選擇與冷凍品管理，都會影響細胞的活性及其表現。不當的冷凍和解凍步驟會降低細胞的存活率，更可能改變細胞特性，而使得試驗前后無法連貫。
