潔凈環境監測用無菌平板培養基適用性檢查注意事項
發布時間：2022-11-28 瀏覽次數：7138
潔凈環境監測用無菌平板培養基屬于商品化的預制培養基。在2020版中國藥典<9203>藥品微生物實驗室質量管理指導原則中明確了 “微生物實驗室使用的培養基可直接采用商品化的預制培養基?！?/span>
目前潔凈環境監測用培養基主要是胰酪大豆胨瓊脂培養基（TSA），該培養基為可滿足廣泛微生物生長的廣譜性培養基，此外還可用適合霉菌酵母生長用的沙氏葡萄糖瓊脂培養基（SDA）。
為保證潔凈環境監測用培養基質量符合潔凈環境空氣及表面微生物檢測的使用要求，使用前應進行適用性技術性驗收。那么這類培養基的適用性檢查該怎么做？有法可依嗎？有的??！
2020版中國藥典<9203>關于環境監控培養基的質量控制指導說明 “用于環境監控的培養基須特別防護，以防止外來污染物的影響及避免出現假陽性結果?！焙唵蔚恼f就是環境監控的培養基應無菌。另外，由于該類培養基的主要作用是將潔凈環境中我們肉眼看不見的微生物培育呈我們肉眼可見的菌落，通過菌落數評估環境微生物污染情況，也就是微生物計數，因此，從這類培養基質量評價還需考慮對微生物促生長的能力。
總的來說，潔凈環境監測用無菌平板培養基應符合培養基的無菌性檢查及促生長靈敏度檢查的要求。
1、潔凈環境監測用無菌平板培養基的無菌性檢查
從每批無菌平板培養基中隨機抽取包裝完整的若干包（具體根據采購數量確定），將包裝完整的預灌裝TSA置于30-35℃溫度培養5天，包裝完整的預灌裝SDA置于20-25℃溫度培養7天，應無菌生長。
操作注意：
1）由于環凱提供的三層包無菌平板培養基采用的是非真空包裝形式，包裝內不缺氧氣，因此，無菌檢查培養無需拆包，完整包裝狀態培養不影響污染微生物的生長，結果直接客觀評價培養基的無菌性。
2）非真空包裝設計的無菌平板培養基，在2℃-25℃儲存期間相當于100%低溫預培養，進一步保證培養基的無菌性。
2、潔凈環境監測用無菌平板培養基的促生長靈敏度檢查
由于潔凈環境監測用無菌平板培養基的用途也是需氧兼性厭氧細菌霉菌酵母等微生物計數，因此，此類培養基的促生長靈敏度檢查，可參考《中國藥典》2020版四部“1105非無菌產品微生物限度檢查：微生物計數法”規定，培養基適用性以回收率和菌落形態作為判定標準（詳見表1 ）
操作注意：
1）試驗用菌株的傳代次數不得超過5代（從菌種保藏中心獲得的干燥菌種為0代），并采用適宜的菌種保藏技術進行保存，以保證試驗菌株的生物學特性。
2）接種測試培養基的測試菌量為不大于100CFU/皿，按藥典菌液制備方法，需把控好適宜濃度的選擇；也可選擇商品化定量菌種替代傳統方法的菌液制備。
3）涂布接種時需注意，如采用火焰灼燒滅菌的涂布棒，涂布前需冷卻至室溫再涂布；涂布時可順時針、逆時針在培養基表面打圈涂布若干圈，使菌液均勻涂布在培養基表面，菌液被培養基基本吸干即停止涂布。涂布圈數根據培養基對菌液吸收程度確定。
4）如菌液被培養基吸干還繼續涂布，對個別微生物（如，大腸埃希氏菌、銅綠假單胞菌）其菌體細胞會造成機械損傷，導致回收率下降。
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