常用細胞增殖與毒性檢?測方法介紹及其比較
發布時間：2023-03-14 瀏覽次數：2120
幾種細胞增殖與毒性檢測方法
01 MTT法
MTT：一種黃色染料，化學名：3-(4，5-二甲基噻唑-2)-2，5-二苯基四氮唑溴鹽，商品名：噻唑藍。檢測原理 為活細胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶能使外源性MTT還原為水不溶性的藍紫色結晶甲臜(Formazan )并沉積在細胞中，而死細胞無此功能。二甲基亞礬（DMSO）能溶解細胞中的甲臜，用酶聯免疫檢測儀在490nm波長處測定其光吸收值，可間接反映活細胞數量。在一定細胞數范圍內，MTT結晶形成的量與細胞數成正比。該方法已廣泛用于一些生物活性因子的活性檢測、大規模的抗腫瘤藥物篩選、細胞毒性試驗以及腫瘤放射敏感性測定等。
優點：靈敏度高、經濟。
缺點：由于MTT經還原所產生的甲臜產物不溶于水，需被溶解后才能檢測。這不僅使工作量增加，也會對實驗結果的準確性產生影響，而且溶解甲臜的有機溶劑對實驗者也有損害。
02 XTT法
XTT：化學名：2,3- bis(2-methoxy-4-nitro-5-sulfophenyl)-5-[(phenylamino)carbonyl]-2H-tetrazolium hydroxide，作為線粒體脫氫酶的作用底物，被活細胞還原成水溶性的橙黃色甲臜產物。當XTT與電子偶合劑（例如PMS )聯合應用時，其所產生的水溶性的甲產物的吸光度與活細胞的數量成正比。
優點：
1. 使用方便，省去了洗滌細胞；
2. 檢測快速；
3. 靈敏度高，甚至可以測定較低細胞密度；
4. 重復性優于MTT。
缺點：XTT水溶液不穩定，需要低溫保存或現配現用。
03 WST-1法
WST-1是一種類似于MTT的化合物，在電子耦合試劑存在的情況下，可以被線粒體內的一些脫氫酶還原生成水溶性橙黃色的甲臜產物( Formazan )。細胞增殖越多越快，則顏色越深；細胞毒性越大，則顏色越淺。WST-1是MTT的一種升級替代產品。
優點：
1. 使用方便，省去了洗滌細胞，不需要放射性同位素和有機溶劑；
2. 比XTT和MTT更加穩定，使實驗結果更加穩定；
3. 與MTT、XTT等相比，線性范圍更寬，靈敏度更高。
04 CCK-8法
CCK- 8全稱為Cell Counting Kit-8，試劑中含有WST-8；化學名：2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑單鈉鹽，它在電子載體1-甲氧基-5-甲基吩嗪硫酸二甲酯( 1-Methoxy PMS )的作用下被細胞線粒體中的脫氫酶還原為具有高度水溶性的黃色甲臜產物( Formazan )。生成的甲臜產物的數量與活細胞的數量成正比。用酶聯免疫檢測儀在450nm波長處測定其光吸收值，可間接反映活細胞數量。該方法已被廣泛用于一些生物活性因子的活性檢測、大規模的抗腫瘤藥物篩選、細胞增殖試驗、細胞毒性試驗以及藥敏試驗等。
優點：
1. 使用方便，省去了洗滌細胞，不需要放射性同位素和有機溶劑；
2. 檢測快速；
3. 靈敏度高，優于WST-1；
4. 重復性優于MTT；
5. 對細胞毒性小；
6. 試劑穩定性很好，優于WST-1；
7. 為1瓶溶液，毋需預制，即開即用。
缺點：
1. 與MTT相比，CCK-8和XTT的價格比較貴；
2. CCK-8試劑的顏色為淡紅色，與含酚紅的培養基顏色接近，不注意的話容易產生漏加或多加。
表1：幾種細胞增殖/毒性檢測方法的比較
| 檢測方法 | MTT法 | XTT法 | WST-1法 | CCK-8法 |
| 甲臜產物的 水溶性 | 差 （需加有機溶劑溶解 再檢測） | 好 | 好 | 好 |
| 適用細胞 | 貼壁 | 貼壁或懸浮 | 貼壁或懸浮 | 貼壁或懸浮 |
| 產品性狀 | 粉末 | 2瓶溶液 | 溶液 | 1瓶溶液 |
| 使用方法 | 現配現用 | 現配現用 | 即開即用 | 即開即用 |
| 檢測靈敏度 | 高 | 很高 | 很高 | 高 |
| 檢測時間 | 較長 | 較短 | 較短 | 最短 |
| 檢測波長 | 560-600nm | 420-480nm | 420-480nm | 430-490nm |
| 細胞毒性 | 高，細胞形態完全消失 | 很低，細胞形態不變 | 很低，細胞形態不變 | 很低，細胞形態不變 |
| 試劑穩定性 | 一般 | 較差 | 一般 | 很好 |
| 批量樣品檢測 | 可以 | 非常適合 | 非常適合 | 非常適合 |
| 便捷程度 | 一般 | 便捷 | 便捷 | 非常便捷 |
普遍認為，CCK-8是操作更簡單、數據更穩定、靈敏度也較高的細胞增殖與毒性檢測方法。CCK-8實驗過程簡單總結為配置細胞懸液、加入待測物質、待測物質與細胞共同孵育一定時間、加入CCK-8、測定吸光度五步。但其中仍有需要注意的地方，值得探討學習。
來源：“金沙生物”公眾號
說明：轉載只為分享目的，如有侵權請聯系刪除，謝謝！
