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CCK-8的實驗過程注意細節
發布時間：2023-03-17 瀏覽次數：1118
普遍認為，CCK-8是操作更簡單、數據更穩定、靈敏度也較高的細胞增殖與毒性檢測方法。CCK-8實驗過程簡單總結為配置細胞懸液、加入待測物質、待測物質與細胞共同孵育一定時間、加入CCK-8、測定吸光度五步。但其中仍有需要注意的地方，值得探討學習。
CCK-8的實驗過程注意細節
01 配置細胞懸液
a. 如果是第一次做或者第一次種此類細胞，建議先做幾個孔去摸索接種數量和培養時間；
b. 細胞懸液一定要混合均勻，避免其沉淀導致每個孔的細胞數量不一樣。
建議在培育時間內不要讓細胞長得太滿，其一無法判斷是否堆積生長會影響藥物進入細胞進而影響OD值，其二生長不均勻會導致孔間OD值偏差較大，影響最終結果。
02 加入CCK-8溶液后孵育的時間
孵育時間與細胞類型和種植細胞的密度是正相關的，建議設定一系列梯度時間分別進行監測，選取吸光度范圍比較適宜的時間點用于后續的實驗。
此外，考慮到孵育過程每孔蒸發量不一樣，所以在加CCK-8時，可以將舊的培養基吸出，然后加入新鮮的培養基與CCK-8混勻液（100：10），再進行檢測。
03 OD值的檢測
影響OD值的因素很多，比如細胞密度、孵育時間、檢測時孔里有氣泡等。
a. OD值過高可以適當減少細胞數量和縮短共同孵育時間；
b. OD值過低則可以適當增加細胞量與延長加入CCK-8試劑后的反應時間。
建議將OD值控制在1.0左右附近，酶標儀與UV的原理類似，都有一個最佳的檢測范圍超過了這個范圍數據就會不穩定，因此為了避免讀數不準確要根據自己的數據范圍設定具體的實驗細節。
來源：“金沙生物”公眾號
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