篩選與鑒定雙歧桿菌方法及實驗步驟！
發布時間：2023-06-06 瀏覽次數：3670
在人類的歷史進程中，有這樣的一類微生物，你肉眼看不到它，但它卻默默地存在著。它們不僅存在，而且還發揮著極大的作用。今天我們就來簡單說一下其中的某種腸道益生菌 — 雙歧桿菌！
● 一、雙歧桿菌到底長什么樣
雙歧桿菌，顧名思義，首先它是桿菌（桿菌？自己先腦補一下棍子的樣子），而且是革蘭氏陽性桿菌（革蘭氏陽性菌最顯著的特點是細菌被革蘭染色后在顯微鏡下呈紫色）。而由于其末端常常分叉，故名為雙歧桿菌。雙歧桿菌肉眼是無法看到的，所以我們只能借助顯微鏡來看清它真實的面目。
雙歧桿菌是1899年由法國Tissier博士從母乳營養兒的糞便中分離出的，不運動、無芽孢、形態多變的桿菌。最適生存溫度為（37～42）℃，最適pH值6.5～7.0，廣泛存在于人和動物的消化道、口腔等環境中。
● 二、雙歧桿菌對人類的作用
這么微小的，需要借助顯微鏡才能看到的雙歧桿菌到底對人類有什么用？
雙歧桿菌是一種重要的腸道有益微生物。其作為一種生理性有益菌，對人體健康具有生物屏障作用、營養作用、免疫增強作用、改善胃腸道功能等多種重要的生理功能。雙歧桿菌數量的多少，是判斷人體健康的晴雨表。
不僅僅如此，雙歧桿菌還能抑制人體有害細菌的生長，抵抗病原菌的感染，合成人體需要的維生素，促進人體對礦物質的吸收，促進排便、凈化腸道環境、刺激人體免疫系統等，對促進人體健康發揮重要作用。
● 三、雙歧桿菌的檢測方法
既然它這么重要（so important），又這么微小（so small），那我們如何在平時食用的食品中檢測它的存在？
下面簡述雙歧桿菌的選擇性篩選和鑒定方法:
1、樣品制備
1.1 樣品的全部制備過程均應遵循無菌操作程序。
1.2 以無菌操作稱取25g（mL）樣品，置于裝有225mL生理鹽水的滅菌錐形瓶內，制成1:10 的樣品勻液。
2、稀釋及涂布培養步驟
2.1 用1mL 無菌吸管或微量移液器吸取1:10 樣品勻液1.0mL，沿管壁緩慢注于裝有 9mL生理鹽水的無菌試管中（注意吸管尖端不要觸及稀釋液），振搖試管或換用1支無菌吸管反復吹打使其混合均勻，制成1:100的樣品勻液。
2.2 另取1mL無菌吸管或微量移液器吸頭，按2.1操作順序，做10 倍遞增樣品勻液，每遞增稀釋一次，即換用1 次1mL滅菌吸管或吸頭。
2.3 根據待鑒定菌種的活菌數，選擇三個連續的適宜稀釋度，每個稀釋度吸取0.1mL 稀釋液，接種在雙歧桿菌瓊脂平板或MRS瓊脂平板，或取0.1mL適當稀釋度的樣品勻液均勻涂布在雙歧桿菌瓊脂平板或MRS瓊脂平板。36℃±1℃厭氧培養48h±2h，可延長至72h±2h。
圖1 雙歧桿菌在MRS篩選平板上的菌落形態
3、純培養：挑取3個或以上的單個菌落接種于雙歧桿菌瓊脂平板或MRS瓊脂平板。36 ℃±1℃厭氧培養48h±2h，可延長至72h±2h。
4、菌種鑒定
4.1 涂片鏡檢：挑取雙歧桿菌平板或MRS平板上生長的雙歧桿菌單個菌落進行染色。雙歧桿菌為革蘭氏染色陽性，呈短桿狀、纖細桿狀或球形，可形成各種分支或分叉等多形態，不抗酸，無芽孢，無動力。
圖2 雙歧桿菌在顯微鏡下的形態觀察
4.2 生化鑒定：過氧化氫酶試驗為陰性。選取純培養平板上的三個單個菌落，分別進行生化反應檢測，不同雙歧桿菌菌種主要生化反應見表1：
● 四、應用討論
雙歧桿菌在人類食品、醫藥和保健等領域已經得到較廣泛的應用，而在動物或畜禽等應用相對有限。限制其應用的主要因素包括：菌株來源不明確，黏附特異性和定植效率低；對氧氣和溫度環境敏感，耐氧性及穩定性低，不利于生產和實際應用；發酵條件要求高，發酵水平低，工業生產成本壓力大等。因此，篩選具有良好技術性能，包括耐氧、耐熱、耐酸耐膽鹽及良好發酵性能菌株對后期生產和應用具有重要意義。
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