RAW 264.7細胞培養方法及注意事項
發布時間：2023-06-25 瀏覽次數：6601
來源：“逍鵬生物”公眾號
原標題：逍鵬講堂 ‖ 如何養好RAW 264.7細胞
RAW 264.7 是實驗室小伙伴經常遇到的細胞，
但培養 RAW 264.7普遍會遇到的一個問題：
養著養著，就分化了！
本期小編就培養RAW 264.7應注意的細節，
逐一為大家“避坑”，
Let's start！
細 胞 介 紹
每一種細胞都有自己的“脾氣”，RAW 264.7更是如此，要想養好它，首先我們得充分了解它，比如生長特點、細胞形態、培養體系等，在這基礎上，養好它自然也是“水到渠成”。
- RAW 264.7 生長圖片 -
英文名稱：RAW 264.7
中文名稱：小鼠單核巨噬細胞白血病細胞
種屬：鼠源
組織來源：Abelson鼠科白血病病毒誘導的腫瘤；單核細胞；巨噬細胞
生長特性：貼壁生長（胰酶會刺激分化）
細胞形態：不規則性（圓形和梭形為主）
傳代比例：1:2 - 1:3
換液頻率：2-3次/周
培養體系：DMEM高糖 +10% 特級胎牛血清 +1% 雙抗
培養條件：5% CO2；37℃
正 確 傳 代 方 法
RAW264.7細胞具有強吞噬能力，細胞在吞噬抗原后釋放趨化因子，促使細胞分化出偽足，因此造成細胞難消化。
RAW 264.7在傳代過程中，不需要使用酶進行消化，酶消化會加速細胞的分化。現在比較常見的是吹打傳代，此方法易于操作，也能很好地控制細胞的分化。
< 傳代的步驟 >
第一步：
用移液管將培養基中的培養液吸干凈。
第二步：
用 PBS 將細胞層清洗1至2遍。
第三步：
用移液管吸取新鮮的培養基輕輕將細胞吹打下來，并將細胞吹打成單細胞懸液，注意吹打的力度，避免過重或者過輕。
第四步：
將吹打好的單細胞懸液進行分裝接種。
注 意 事 項
1、根據我們的經驗，RAW264.7三天就可能分化，吹下的難度也大大增加，通過及時傳代將RAW 264.7的分化比例控制在合理的范圍內。
2、該細胞不建議使用胰酶消化，胰酶會刺激分化，超過3天不傳代細胞容易分化。培養時，存在少量分化細胞，屬于正常現象。
3、推薦使用吹打傳代，可以有效控制細胞分化。
4、當細胞的密度達到80%-90%的時候，最容易吹下；密度較低，不太好吹下來。
5、接種的密度需要控制好，推薦進行高比例的傳代。
6、推薦使用高質量的胎牛血清，血清的質量差異會導致貼壁能力的變化。
7、隨著培養時間的增加，細胞呈現圓形并以疊加的形式生長。當細胞的密度增加到一個“臨界點”的時候，會有細胞散落到培養基中，此時懸浮和貼壁的細胞會同時出現在視野中 。
8、由于堆積生長，有些細胞脫落漂浮，在傳代時應收集起來，離心后細胞沉淀可以繼續培養。
9、切勿強制吹下所有的細胞，貼壁較牢或已分化的細胞可丟棄，就只需接種較容易吹打下來的未分化的細胞即可。
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