RAW?264.7細胞培養，小鼠單核巨噬細胞白血病細胞培養攻略
發布時間：2023-11-08 瀏覽次數：3245
RAW 264.7，小鼠單核巨噬細胞白血病細胞，來源于雄性Abelson鼠科白血病病毒誘導的腫瘤，是常用的炎癥細胞模型之一，常見于研究細胞吞噬、細胞免疫、分子免疫學。
RAW264.7 屬單核細胞/巨噬細胞系，具有松散貼壁的短梭形細胞和圓形活細胞。細胞常用DMEM培養基，含10%優質胎牛血清，一般2-3天傳代一次，推薦傳代比例1:3-1:4，但RAW264.7在培養過程中容易出現細胞形態改變（長出偽足）、消化困難、生長緩慢等問題，需要我們特別注意以下幾點：
1. RAW 264.7 因其具有較強的吞噬能力，吞噬后釋放的趨化因子可促使細胞分化出偽足，粘附攀爬能力增強。若細胞吞噬抗原過多、培養環境惡劣，會促使細胞形態改變成多角形且面積增大，時常有較長的黑色觸角，導致細胞消化困難，因此要盡量避免細胞發生形態改變。即在接種細胞時保持一個適中的傳代密度，避免其向終末細胞分化。
2. RAW264.7喜歡連片生長，低密度下一片一片分布在培養皿中且不相連接，高密度下才會連成大片且可能疊加成層，導致部分細胞漂浮無法貼壁，因此，培養時要密切關注細胞匯合度，控制細胞生長速度，不可等到疊加成層才傳代。
3. RAW264.7傳代后貼壁較短，約半小時即可貼壁，細胞呈圓形，折光度很好，生長一段時間后，部分細胞會變成類似四角形，伸出偽足之類。此時必須傳代，無論匯合度如何都需要進行傳代，避免細胞形態進一步發生改變。
4. RAW264.7不能用胰酶消化，推薦吹打傳代。分化的細胞貼壁牢固，傳代的時候千萬不要強制性吹下這些細胞，只接種容易吹下的那些未分化細胞；吹打的力度一定要輕，切勿暴力吹打；推薦使用巴氏管吹打；亦可在液體環境下用細胞刮刀將細胞刮下來。
5. 細胞培養時無法保證100% 不分化，但通過傳代可以更好地控制細胞分化率。
6. RAW264.7在不同生長密度下細胞形態不同，若復蘇密度太高，細胞增殖過快，會加劇細胞的營養缺失，加速細胞老化；若復蘇密度太低，細胞生長緩慢，推薦采用直徑6cm的培養皿復蘇細胞，細胞數量控制在1.0×10^6~1.5×10^6個。
7. 細胞剛接種有少量短觸角，屬于正?，F象，如果出現胞體變大，突觸伸長可以已經發生了分化。對于輕微分化細胞，可以輕吹起部分細胞，更換培養環境后進行調整。
RAW 264.7培養注意事項：
1. RAW 264.7 容易發生形態變化，在接種細胞時務必保持適中的傳代密度，避免其向終末細胞分化；
2. RAW264.7喜歡連片生長，在不同生長密度下細胞形態不同，高密度下細胞容易漂浮，因此密切關注細胞匯合度，及時傳代；
3. RAW264.7不能用胰酶消化，推薦吹打傳代，亦可在液體環境下用細胞刮刀將細胞刮下來；
4. 細胞剛接種有少量短觸角，屬于正?，F象，如果出現胞體變大，突觸伸長可能已經發生了分化。對于輕微分化細胞，可以輕吹起部分細胞，更換培養環境后進行調整，或者盡快傳代，避免形態進一步改變。
文章來源：“豐暉生物”公眾號，作者~。
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