食品微生物無菌室的內部質量控制
發布時間：2025-07-07 瀏覽次數：71
無菌室是進行細菌、酵母、霉菌以及各類致病性微生物檢驗的關鍵場所，其是否達到無菌操作要求，內部質量控制體系是否完善直接關系到食品微生物學檢驗結果的準確性。
無菌室的整體布局
從總體布局上看，無菌室的墻壁、地面和天花板要求表面平整光滑、易于清洗，不易滲漏液體，并能抵抗常用消毒劑的腐蝕。無菌室一般要求要完全密閉，并保持好日常衛生，以防止室外不凈氣體和部分昆蟲進入，與外界應有完善的物流窗和高效空氣過濾除菌設備。
無菌室內應備有工作濃度的常用消毒液，如苯酚酸(堿)溶液，75％的酒精，0.1％的新潔爾滅溶液等等。
無菌室的位置一般要求建在人員流動較少的地方，距離普通的辦公環境或者微生物準備室要有一定的距離。無菌室內必須配備相應的緩沖工作間用于擺放專用白大褂或專用衣帽等。
無菌室中的物流窗應避免與空氣產生直接對流，最好不要正對著無菌室大門；空調需有可靠的多重高效過濾除菌系統；所有照明和紫外燈電源總開關應設置于無菌室門口或門外。無菌室整個布局設計應按照人、物分離原則，防止交叉污染。
此外，在人員通道可配備高效風淋室以減少實驗人員帶入的污染。對無菌室和其內部的超凈工作臺、生物安全柜都必須進行定期監測和日常維護，并有監測和維護記錄。日常維護主要包括紫外線燈擦拭、濾網擦洗更換、空氣消毒及全面清潔衛生等川。
無菌室的建材使用控制
用于無菌室建設的所有材料均應符合消防和環保要求，具有耐腐蝕和易清潔的特點。無菌室的內部裝修應整齊、光滑、避免凹凸、所有角落最好設置為球弧體狀以避免灰塵長期堆積難以清掃和消毒。
無菌室的各個通道進出口應采用門縫緊密且打開后能自動閉合的推拉式門，墻壁及吊頂應采用隔熱防火、耐化學腐蝕、耐水分滲透、隔音且易清潔的新型建材以防止塵垢堆積、材料脫落、滋生霉菌、不易清潔等情況的發生。
總體上，無菌室應盡量設計成完全封閉的模式，一般僅靠高效過濾系統與外界進行空氣交換。當前空氣潔凈技術已經發展得比較成熟，在很多學科領域都得到了廣泛的應用，目前很多食品微生物檢測用的無菌室也都已采用比較先進和方便易用的的層流凈化系統裝置，基本上都能保證食品微生物學檢驗過程中無菌狀態、恒溫恒濕、穩定風速風量和空氣潔凈度的要求。
無菌室環境及凈化控制
無菌室無菌環境的質量控制是微生物檢驗獲得準確數據極為重要的環節。食品微生物學檢驗對無菌的環境和無菌操作的要求非常嚴格，整個檢測過程始終要求在無菌狀態下以無菌操作方式進行，所以對無菌狀態的質量控制是微生物檢驗結果準確可靠的保證。
操作人員要嚴格定期對無菌室消毒效果進行評價，同時要制定合理的環境監測程序，對環境監測結果進行數據分析，嚴格按照相應國家標準設定的不同工作區域可接受的菌落數量，對出現超標情況的處理要進行文件化控制。
此外，無菌室內的環境情況例如溫度和濕度等可能會影響無菌室內的消毒滅菌效果，通常情況下溫度應控制在22℃左右，相對濕度不超過65％會比較適宜。
整個無菌室應采用先進高效層流空氣凈化系統以保證恒溫、恒濕、換氣量和空氣潔凈度的相關要求。空氣凈化系統中的高效過濾膜能對空氣中不同大小規格的塵埃粒子進行有效過濾，防止附著在塵埃粒子上的微生物污染無菌室；采用從頂部送風、下側回風的氣流組織方式既保證了潔凈度，又節約了能源。
在無菌室、人員通道及物流窗內安裝紫外殺菌燈能對物體表面和空氣進行消毒；工作時風淋室內的高效過濾空氣能吹去附著在操作者工作服上的部分塵埃，物流窗可傳遞實驗用品和樣品，這些設計都能保證無菌室的潔凈要求。
同時高效空氣過濾系統通風量能滿足人員的需要，較好解決傳統無菌室不能置換新鮮潔凈空氣、工作環境差等問題。
此外，應定期對無菌室的無菌程度進行監測，可參考醫藥工業潔凈室相關標準對于塵埃粒子、沉降菌、浮游菌等項目的限量對食品微生物無菌室進行定期測試。
沉降菌法有最簡單、最直觀，也最能真實地反映物體表面(特別是控制部位)自然污染程度的特點，故也可采用平板計數瓊脂和孟加拉紅瓊脂平板各3塊，等距離置于無菌室工作位置的一條對角線上，開蓋暴露15min，分別在36℃培養48h，28℃培養5d后計數沉降的細菌和霉菌及酵母的菌落數，若平均菌落數超過3CFU/皿，則應當對無菌室空氣和無菌室內的物體表面進行消毒以改善其無菌環境。
同時微生物無菌室應制定切實有效的各項生物安全制度并嚴格執行，例如在進入放置有生物安全柜的致病菌操作間大門要裝透明的可視玻璃，大門上要貼上相應安全等級的“生物危害”圖標，并清晰附上緊急情況聯絡人的聯系方式。
在不同區域放置可自動關閉的專用垃圾桶，在裝紫外燈的區域如物流窗外要貼上相應的“內有紫外殺菌燈”等警示標識。
無菌室內人員操作規范化控制
在無菌室內進行食品檢驗前應保證其無菌狀態，先打開空氣凈化系統和紫外燈，至少保證紫外燈對空氣和無菌室內物體表面殺菌30min。
由于紫外線殺菌不會產生二次污染，因此，此方法優于化學殺菌，保證了室內人員及設備的安全。進入無菌區應洗手、更衣、換鞋。戴帽子和口罩，以保證無菌物品存放區的空氣潔凈度。
無菌室一般僅限實驗操作人員進入，協助人員可在物流窗以外進行觀察或協助，實驗操作進行時人員不得頻繁進出，要嚴格保證風淋設備的運行和各扇門的關閉狀態。
檢驗人員首先要嚴格保證自身的凈化，在進入無菌室前先用洗手液洗手后進入緩沖間換專用鞋和白大褂，在風淋室風淋后進入無菌室。
開始檢驗時用75％酒精對雙手進行擦拭消毒。操作人員進入無菌室操作，動作要輕，幅度要小，盡量避免不必要的走動；檢驗時要盡量避免頻繁談話，盡量縮短無菌檢驗樣品在空氣中的暴露時間；
應通過物流窗傳遞實驗物品，人員進出要隨手關門；應最大限度縮短在無菌室內的操作時間，能在無菌室外進行的準備工作，應杜絕在無菌室內進行；要嚴格保證無菌室的清潔度，檢驗完畢可用棉花蘸取75％酒精擦拭工作臺面，人員最后離開無菌室后再打開無菌室和超凈工作臺內的紫外燈照射30min后關閉。
無菌物品的使用和保存控制
無菌是指在環境中一切有生命活動的微生物的營養細胞及其芽孢或孢子都不存在的狀態。
要保證食品微生物指標檢驗的準確性，就必須做到環境無菌、儀器無菌、培養基無菌、人員無菌、操作無菌這5個無菌。一般要求微生物液體培養基要進行高壓蒸汽滅菌，培養皿和吸管等物品應該用報紙包嚴實進行170℃干熱滅菌2h。
干熱滅菌后的物品應放置于烘箱內或無菌室的超凈工作臺內，保證報紙包裝無破損并盡快使用；滅菌后的液體培養基若不立即使用應置于4℃冰箱內保存備用。
無菌物品存放的有效期，受到滅菌后物品的干燥度，包裝材料、封口的嚴密性、滅菌條件和儲存環境等諸多因素影響。對于干熱滅菌后的無菌培養皿和吸管等物品，若能保證報紙無破損并能阻擋空氣中微生物滲入，其有效期一般能適當延長，至少能保存一個月的時間；對于滅菌后放置于4℃冰箱內的液體培養基最好不要超過一周。
此外，保存期受到環境影響較大，對于潮濕天氣和多雨季節應縮短其保存天數。
無菌室的日常管理監測控制
一般在無菌室內不要擺放太多不必要的實驗物品以減少無菌室內物品污染的幾率，只需要放置酒精燈、接種環、無菌剪刀和鑷子，消毒酒精等常規用品和電子天平、均質器、水浴鍋等儀器設備，物品要歸位放置，不可隨意擺放移動。
無菌室無菌程度要定期監控并及時進行適當消毒處理；紫外線燈管表面也要防止灰塵堆積，及時用酒精棉球擦拭，有損壞的要及時更換。有條件的檢測室可用塵埃粒子計數器定期測定工作區的潔凈度，一年左右可聯系廠家清理或更換高效空氣過濾器的濾芯。
此外，當檢測人員患感冒等呼吸道疾病時應暫時避免進入無菌室。
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