培養基原材料 — 瓊脂質控方法介紹！
發布時間：2022-09-02 瀏覽次數：3902
瓊脂的質控指標包括色澤、氣味和形態等感官要求，水分、灰分、淀粉試驗、水不溶物、重金屬、凝固溫度、融化溫度、凝膠強度和澄清度等理化指標，以及生物學指標。本文重點介紹凝膠強度、水分、澄清度和生物學指標。
1、凝膠強度
GB 1975- 2010《食品安全國家標準 食品添加劑 瓊脂(瓊膠)》中 A.5 凝膠強度的測定法 可以精確測定凝膠強度。因國家標準方法比較復雜，通常采用凝膠強度儀或質構儀進行測定。
配制1.5%瓊脂水溶液，加熱煮沸至完全溶解，121°C高壓滅菌30min，冷卻至50°C左右，搖勻，倒人50mL燒杯中，每杯加25mL，凝固后，將燒杯倒置過夜，提前取出置25°C左右放置30min，用凝膠強度儀進行測定，至瓊脂表面壓破為止，顯示的數值為凝膠強度，單位是g/cm2，每個樣品測定3個平行，取平均值。質構儀按照說明書進行操作。GB 1975- 2010規定瓊脂的凝膠強度（1.5%溶液，20°C）可分為低強度150g/cm2 ~ 400g/cm2、中強度401g/cm2 ~ 800g/cm2、高強度801g/cm2 ~1200g/cm2和超高強度>1200g/cm2。
2、水分測定
瓊脂水分的測定方法一般采用直接干燥法、減壓干燥法和紅外干燥法，其中直接干燥法和減壓干燥法詳見 GB 5009.3-2010《食品安全國家標準 食品中水分的測定》中第一法和第二法。因紅外干燥法操作簡單，本書重點介紹該方法。
稱取瓊脂2g~3g，均勻分布于托盤上，置水分測定儀上進行測定，設置烘烤溫度為105°C ，通過紅外線烘烤至恒重，根據樣品重量的變化，自動顯示水分的數值。平行測定兩次，取其平均值。GB 5009.3- 2010 規定水分≤22%，2015版藥典規定水分≤20%。
3、澄明度
配制1.5%瓊脂水溶液，加熱煮沸至完全溶解，121°C高壓滅菌30min，冷卻至50°C左右，搖勻后倒入10mm×10mm比色杯，待凝固后倒置，放 4h后用可見光分光計測定。也可以搖勻后倒人酶標板，待凝固后倒置，放30min后用酶標儀測定。分別測定在430nm、525nm 和 655nm 波長時的透光率。430nm 在 0.5~0.75、525nm 在 0.3~0.49 和 655nm 在0.2~0.3。
4、生物學檢驗
1. 營養瓊脂的配制
配方成分如下表：
| 配方成分 | 用量 |
| 蛋白胨 | 10.0g |
| 牛肉浸粉 | 3.0g |
| 氯化鈉 | 5.0g |
| 瓊脂 | 15.0g |
| 蒸餾水 | 1L |
| pH值（25°C） | 7.3±0.2 |
稱取上述成分于1L蒸餾水中，加熱煮沸至完全溶解，121°C高壓滅菌15min，冷卻至46°C左右，鋪平板備用。
2. 質控菌株
大腸埃希氏菌ATCC25922、金黃色葡萄球菌ATCC6538、銅綠假單胞菌CMCC(B)10104和枯草芽孢桿菌ATCC6633。
3. 質控方法
采用GB4789.28-2013《食品安全國家標準 食品微生物學檢驗 培養基和試劑的質量要求》中定量的方法中表D.1測定質控菌株的回收率。
4. 結果判定
判定結果參照如下表：
| 質控菌株 | 質控指標 | 方法 | 培養條件 | 質控評定標準 | 特征反應 |
| 大腸埃希氏菌ATCC25922 | 生長率和特異性 | 定量 | 36°C±1°C 24h±2h | PR≥0.7 | — |
| 金黃色葡萄球菌ATCC6538 | PR≥0.7 | 產生黃色色素 | |||
| 銅綠假單胞菌CMCC(B)10104 | PR≥0.7 | 產生綠色色素 | |||
| 枯草芽孢桿菌ATCC6633 | PR≥0.7 | — |
