培養基主要營養類原材料生物學檢驗
發布時間：2022-09-05 瀏覽次數：2574
生物學指標檢驗是培養基營養類原材料最主要和最關鍵的指標，直接關系培養基的質量好壞。原材料生產廠家和培養基生產廠家都應重點進行檢測。主要檢測的指標有可發酵糖試驗、H?S試驗、靛基質(吲哚)試驗、V-P試驗、生長試驗、色素試驗、菌落總數檢測和耐熱芽孢桿菌總數等。
1. 可發酵糖試驗
稱取樣品2.0g、氯化鈉0.5g、酚紅0.002g、蒸餾水或去離子水100mL，配制成溶液，調節其pH值至7. 2~7.4，分裝于含有小倒管的試管中，每管6. 0mL，115°C高壓滅菌15min后，接種大腸埃希氏菌和鼠傷寒沙門氏菌18h~24h的新鮮培養物，35°C±2°C培養18h~24h，觀察結果。陰性結果：培養基顏色為橙紅色或紅色，不產氣。
陽性結果：培養基顏色變成黃色，產氣或不產氣。
2. H?S 試驗
稱取樣品1. 0g、氯化鈉0.5g、蒸餾水或去離子水100mL，配制成溶液，調節其pH值至7.2~7.6，分裝于試管中，每管6.0mL，121°C高壓滅菌15min后，接種鼠傷寒沙門氏菌的18h~24h的新鮮培養物，將醋酸鉛(PbAc)試紙插入試管中，試紙下端距離液面2cm~3cm，蓋好試管蓋30°C~35°C培養24h~48h，觀察結果。
陽性結果：醋酸鉛試紙條變黑，且黑色域不得小于0.5cm。陰性結果：醋酸鉛試紙條不變黑或黑色域小于0.5cm。
3. 靛基質(吲哚)試驗
稱取樣品2.0g、氯化鈉0.5g、蒸餾水或去離子水100mL，配制成溶液，調節其pH值至7.2~7.6，分裝于試管中，每管6.0mL，121°C高壓滅菌15min；高壓滅菌后，分別接種大腸埃希氏菌、鼠傷寒沙門氏菌的18h~24h 的新鮮培養物，35°C±2°C培養18h~24h。觀察結果時每管加人2~4滴靛基質試劑。10s內液面上出現玫瑰紅色環者為陽性，出現黃色者為陰性。大腸埃希氏菌應為陽性，鼠傷寒沙門氏菌呈陰性。
4. V-P試驗
稱取樣品0.7g、葡萄糖0.5g、氯化鈉0.5g，加100mL的蒸餾水或去離子水配制成溶液，調節其pH值7.2~7.4，以每管6.0mL分裝，115°C高壓滅菌15min后，分別接種產氣腸桿菌、大腸埃希氏菌的18h~24h新鮮培養物，35°C±2°C培養18h~24h。觀察結果時，除去試管帽，依次加入VP試劑甲、乙液，甲液6滴，乙液2滴，混合均勻，放置36°C培養箱孵育30min，溶液變紅色為陽性，不變色為陰性。產氣腸桿菌呈陽性反應，大腸埃希氏菌呈陰性反應。
5. 色素試驗
稱取樣品2. 0g、氯化鈉0.5g、瓊脂1. 2g，加入100mL的蒸餾水或去離子水中，加熱完全溶解，調節pH值7.2~7.4，121°C高壓滅菌15min。高壓滅菌后，待溫度降到50°C左右時傾注平板，充分凝固后，四區劃線接種金黃色葡萄球菌和銅綠假單胞桿菌的新鮮培養物，35°C±2°C培養18h~24h，觀察結果。應生長良好，金黃色葡萄球菌有黃色色素生成，銅綠假單胞菌有綠色色素生成。
6. 生長試驗
(1)質控菌株：大腸埃希氏菌、金黃色葡萄球菌、鼠傷寒沙門氏菌、銅綠假單胞菌、福氏志賀氏菌、乙型溶血性鏈球菌。
(2)液體培養基生長試驗(九管法)
1)培養基配制：2.0g樣品、0.5g氯化鈉，加人到100mL的蒸餾水或去離子水中，加熱完全溶解，調節pH值至7.2~7. 4，分裝試管，每管9mL，121°C高壓滅菌15min后，冷卻備用。
2)操作方法：將質控菌株18h~24h新鮮培養物用無菌水制成10?標準菌懸液(與標準比濁管比較)，10倍梯度稀釋至10??，依次接種10??、10??、10??菌懸液于液體培養基管中，每個濃度重復3管，35°C±2°C培養18h~24h。同時用合格品做對照品，樣品應與對照品結果基本一樣或優于對照品時，判為合格。
(3)固體培養基生長試驗(平皿定量滴加法)
1)培養基配制：2.0g樣品、0.5g氯化鈉、1.2g瓊脂，加入到100mL的蒸餾水或去離子水中，加熱完全溶解，調節pH值7.2~7.4，121°C高壓滅菌15min后，倒平板，待充分凝固后并倒置于37°C培養箱1h~2h后，備用。
2)操作方法：制備好的固體培養基，用記號筆成90°C交叉劃線分成四份，依次滴加10mL濃度為10?CFU/mL、10?CFU/mL、10?CFU/mL、10?CFU/mL的質控菌株菌液(見圖4-5-1)，輕輕搖動，待菌液吸干后倒置于35°C±2°C培養18h~24h。同時用合格品做對照品，樣品應與對照品結果基本一樣或優于對照品時，判為合格。
(4)生長試驗結果評判
1)九管法和平皿定量滴加法都合格時，此原材料適合絕大部分培養基使用。
2)九管法合格，而平皿定量滴加法不合格時，此原材料適合于大部分液體培養基使用。
3)九管法不合格，而平皿定量滴加法合格時，此原材料適合于大部分含瓊脂培養基使用。
4)兩種都不合格時，此原材料為不合格，最好不要用于配制培養基。
7. 菌落總數檢測
稱取25g樣品溶解于225mL無菌蒸餾水或去離子水后，制成10倍系列稀釋液，選取兩三個適宜稀釋度，吸取1mL樣品液涂布于平板計數瓊脂(PCA)平板上，36°C±1°C培養48h±2h計數結果，需做2個重復。
8. 耐熱芽孢桿菌檢測
稱取25g樣品溶解于225mL無菌蒸餾水或去離子水后，制成10倍系列稀釋液，選取兩三個適宜稀釋度，吸取1mL樣品液涂布于葡萄糖胰蛋白胨瓊脂平板上，55°C±1°C培養48h±2h計數結果，需做2個重復。
主要營養類原材料的生物學檢驗指標見表4-5-2。
